Pag-amping alang sa polyacrylamide gel electrophoresis

· polyacrylamidegel kinahanglan pinaagi sa acrylamide monomer, polymerization sugod nga materyal, catalyst, ug ang katungod sa asin ug buffer sagol sa tingub.

· acrylamideug BIS (N, N '- methylene double acrylamide) mao ang monomer nga porma gel matrix.

· ammonium persulfate magsugod adhesive polymerization proseso. Ang pagporma sa papilit nanginahanglan 10% nga solusyon sa ammonium persulfate nga giandam sa tubig. Kadaghanan sa impormasyon nagpakita sa panginahanglan alang sa aktibong paggamit. Bisan pa, ang 10% nga solusyon mahimong ibutang sa 4 ℃ sulod sa daghang mga semana nga wala’y hinungdan nga pagkawala sa kalihokan. Paghimo hangtod sa 10 ml ug isalikway kung ang papilit mapakyas sa pagtipon.

Tip: Ang porsyento saacrylamidesa sequencing glue ug protina glue dili parehas. Kung naggamit ug premade acrylamide: BIS nga solusyon, siguroha nga makuha ang husto nga botelya.

· TEMED (N, N, N ', N '- tetramethyl ethylenediamine) kay usa ka catalyst, sa usa ka brown nga botelya, gibutang sa refrigerator. Idugang sa dili pa ibubo ang papilit.

· polyacrylamide electrophoresis gigamit bildo sa electrophoresis kinahanglan nga hugasan sa wala pa ug human sa matag higayon. Human sa electrophoresis, hugasi gamit ang humok nga brush ug panapton sa init nga tubig nga may sabon, hugasi gamit ang distilled water ug barog nga mamala.

· Ang kaumog ug abog mahimong hinungdan sa hollow polymer. Sa wala pa ang electrophoresis, limpyohan ang bildo nga plato gamit ang glass cleaner ug pahiran kini gamit ang humok nga brush. Hugasi gamit ang distilled water ug uga nga maayo gamit ang papel nga pagpahid. Ang paghugas sa 70% nga ethanol sa dili pa pagpahid gamit ang papel makatabang sa paglimpyo ug pagpadali sa pagpauga. Pagdugang og mga sample sa acrylamide nga sunodsunod: BIS, tubig, buffer solution, ammonium persulfate, TEMED. Pag-uyog og maayo ug ibubo dayon.

Dili kinahanglan nga i-degass ang polyacrylamide sa wala pa ang polymerization. (Ang acrylamide kaniadto gibutang sa usa ka vacuum aron makuha ang mga bula tungod kay ang oxygen nagpugong sa polymerization.)

Horizontal glue point sample tips.

· pagbutang og usa ka piraso sa itom nga papel sa ubos nga kahon, itom nga background aron makahimo og sample hole aron mas klarong makita.
· Glue tank nga puno sa buffer, sa ibabaw lang sa colloid.
· kung ang ngilit adunay suga, pasigaa ang mga suga, pasagdi ang kahayag nga modan-ag sa colloid. Idrowing ang sample sa pipette.
· gamit ang automatic pipetting device.
· sa 10-200 mu 1 liquid moving point mahimong gamiton sa kadaghanan sa mga punto sa sample. Alang sa gamay kaayo nga mga lungag sa sample (ubos sa 10μ1), ang taas nga ulo sa pipette nga gigamit alang sa pagsunud sa glue mas kombenyente.

· Ang pipetting nga gituslob lang sa sample, nag-inhaling sa hinay nga paglihok nga pluwido. Ang sample mahimong mopatim-aw nga mopilit sa glycerin, ug ang paspas nga pagbomba mahimong mokuha ug hangin nga bula sa ulo sa pipette.

· Ang mga sample pagkahuman sa pagginhawa sa ulo sa pipetting, hinayhinay nga palihokon ang fluid nga ulo sa ngilit sa tubo o pagpahid sa papel nga nagsuyop sa ulo sa likido sa gawas sa mga tinulo. Pag-amping nga dili pagsuyop sa sample.

Ibutang ang sample sa sample hole

· pipetting device aron sa pagbantay sa usa ka gamay nga pressure, sa paghimo sa mga sample gamay mobalhin overflow liquid ulo.
· ang pipetting ulo nga gisal-ut ngadto sa buffer, gamay nga mas taas pa kay sa spot hole, sa pagpadayon sa positibo nga pressure. Ang tumoy sa pipette mahimong isulod sa gamay nga lungag.
· hinay-hinay ug makanunayon nga paggawas sa mga sample. Ang tumoy sa pipette gibutang sa ibabaw sa punto nga sample hole, ug ang sample mounlod sa lungag. Pasagdi nga malunod ang sample aron mapuno ang sample hole imbes nga itulod.
· Sa higayon nga ang katapusan nga pagtulo sa sample nga adunay likido nga ulo, ang likido mobalhin sa ikaduhang paa, hinayhinay nga ipataas ang likido nga paglihok, mogawas sa buffer

Unsa nga paagi sa pagbuhat sa bertikal glue sampling?

· bertikal glue point sample buslot nga naporma taliwala sa duha ka piraso sa bildo. Sa nipis kaayo nga papilit, ang ulo sa pipette dili gani masulod sa tunga sa duha ka plato nga bildo. Tan-awa ang gliserin! Ibutang ang ulo sa pipette ibabaw sa sample hole ug ang sample mounlod sa lungag.
· punto sample sa wala pa, siguroha nga ibutang ang bertikal punto sa polypropylene acyl gel sample lungag mao ang rinsed limpyo. Hugasi ang unpolymerized acrylamide ug ang tubig nga mahimong makita sa ilawom sa sample hole. Ang tubig makahimo sa sample hole nga mas gamay. Gamit ug 25ml o 50ml nga syringe ug 18-gauge nga dagom. Ibubo ang electrophoresis buffer ug maampingong i-flush ang sample hole.
· Mahimong lisud ang pagtan-aw sa sample hole, apan sa samang paagi, ang uban sayon. Kung adunay sobra nga mga lungag, ang sample buffer mahimong masulayan gamit ang bromophenol blue.